Bakterite kasvu mõõtmiseks on palju viise ja üks viis on keerulisem kui teine. Kuigi mõnikord tuleb mõõtmiste järjepidevust ignoreerida, piisab bakterite kasvu täpseks mõõtmiseks lihtsaimast viisist, nii et seda kasutatakse sageli. Kõige sagedamini kasutatavad meetodid on bakterite jälgimine ja loendamine, kuiva või märja massi mõõtmine ning hägususe/hägususe taseme mõõtmine. Teie kooli laboris peaks olema tööriistad ja seadmed, mis on vajalikud vähemalt ühe neist katsetest.
Samm
Meetod 1 /3: bakterite jälgimine elusalt
Samm 1. Valmistage koostisosad ette
On vaja valmistada palju spetsiaalseid tööriistu, mis ei pruugi bioloogialaboris saadaval olla. Enne katse läbiviimist valmistage ette kõik seadmed ja mahutid, et protsessi käigus ei tekiks probleeme. Peate teadma kõiki kasutatud koostisosi ja selle katse põhitingimusi.
- Valmistage loenduskamber ette. Sellel on sisseehitatud kamber, mikroskoobi klaas ja mikroskoop, nii et seda on lihtne seadistada ja kasutada. Saate seda osta laborist või koolitarvete kauplusest. Sellel tööriistal peaksid olema juhised, mis juhendavad teid kogu protsessi vältel.
- Valmistage ette valamistops või määrdetops. Mõlemad mahutid võimaldavad teil jälgida sees olevaid baktereid.
- Kultuur on termin, mida kasutatakse katses organismide kasvu kirjeldamiseks.
- Puljong on vedel sööde, milles kultuur kasvab.
Etapp 2. Kasutage valamisplaadi või puisteplaadi meetodit
Samuti saate paigutada bakterid mikroskoobi abil vaatamiseks otse tassile. Valage kultuur alusele ja asetage see mikroskoobi alla. Jälgige olemasolevate bakterirakkude arvu.
Samm 3. Veenduge, et kontsentratsiooniannus oleks õige
Kui neid on liiga palju, kuhjuvad bakterid üksteisele ja võite valearvestuse teha. Lahjendage kultuur, segades juurde puljongit. Kui neid on liiga vähe, pole arvutuste tulemused täpsed. Kurna puljong filtreerimissüsteemi abil.
Samm 4. Loendage bakterid
Viimane samm on bakterite loendamine ükshaaval. Vaadake loenduskambris olevat suurendusklaasi ja kirjutage üles nähtavate bakterite arv. Võrrelge tulemusi teiste testide tulemustega.
Meetod 2/3: kuiva ja märja massi mõõtmine
Samm 1. Veenduge, et teil on õige varustus
See meetod kasutab kalleid seadmeid ja palju aega. Kui teie laboris pole vajalikke seadmeid, on hea mõte kasutada mõnda muud meetodit. Kui aga teie labor on piisavalt hästi varustatud, soovitame seda meetodit, kuna see annab järjepidevamad tulemused. Selle meetodi puhul vajate:
- Hüdrauliline gravitatsiooniline konvektsioonahi
- Alumiiniumist kaalumisanum
- Kolbide komplekt (laboripudelid)
- Tsentrifugaalmasin (tsentrifuug) või laboratoorne filtreerimissüsteem
Etapp 2. Veenduge, et kultuur oleks kolvis
Lisage kultuur kõrvitsale. Selles etapis peaks kultuur olema puljong, kuigi hiljem eraldatakse see uuesti.
Samm 3. Kuivatage alumiiniumist kaalumisanum laboratoorses ahjus
Selle asemel võite kasutada tselluloosatsetaatfiltrimembraani läbimõõduga 47 mm ja pooride suurusega 0,45 µm. Ükskõik millist kaalumisanumat kasutate, kaaluge seda, kuna see tuleb bakterirakkude kaalumisel hiljem maha arvata.
Etapp 4. Segage kultuuri kolvis, kuni see on ühtlaselt segunenud
Rakk vajub raskusjõu mõjul loomulikult alla ja seda tuleb segada, et see kolvis ühtlaselt leviks. Nii saate rohkem proove.
Etapp 5. Bakterirakkude eraldamiseks puljongist kasutage tsentrifuugi
See tööriist pöörab kolbi ja tasakaalustub kiiresti, nii et see tühjendab puljongi ja jätab kultuuri kolbi.
Samm 6. Kraapige kõrvitsale pasta maha ja pange see kaalumisnõusse
Viska puljong välja, sest sa ei vaja seda enam. Kuid ärge veel kõrvitsast lahti saada, sest seda kasutatakse endiselt.
Samm 7. Loputage tsentrifugaalmasin ja valage loputusvesi anumasse
Märja kaalu saamiseks tilgutage kolvis olev loputusvesi bakterirakkudele.
Samm 8. Leidke kuivkaal
Kuiva massi mõõtmiseks asetage anum ahju ja kuivatage 100 ° C juures 6-24 tundi vastavalt ahju ja/või kasutatud kaalumisnõu juhistele. Veenduge, et temperatuur ei oleks liiga kõrge, et bakterid ei põleks. Kui olete lõpetanud, kaaluge bakterid ja ärge unustage tulemust kaalukausi massi võrra vähendada.
Meetod 3 /3: Hägususe mõõtmine
Samm 1. Valmistage ette vajalikud seadmed
Teil on vaja valgusallikat ja spektrofotomeetrit. Mõlemat saab osta laboritarvete kauplustest. Spektrofotomeetril peaks olema juhised, mis juhendavad teid seadme kasutamisel vastavalt teie mudelile. Spektrofotomeetri hind on üsna taskukohane ja hõlpsasti kasutatav, nii et sellest võib saada üks levinumaid meetodeid bakterite kasvu mõõtmiseks.
Samm 2. Valgustage proov
Laymani termini kohaselt on hägusus proovi hägususe tase. Peate hankima hägususe mõõtmise numbri, mida mõõdetakse NTU -s (nephelomeetriline hägususühik). Enne tööriista täpset mõõtmist tuleb see tööriist kalibreerida.
Samm 3. Salvestage tulemused
Hägusust mõjutab bakterite arv proovis. Spektrofotomeeter näitab ka ülekande protsenti (%T). See näitaja suureneb, kui hägusus väheneb. Võrrelge tulemusi teiste testide tulemustega, et mõõta bakterite kasvu.
Hoiatus
- Kuna tegemist on bakterikolooniaga, võtke ettevaatusabinõusid, kandes turvavarustust, näiteks kaitseprille ja kindaid. Samuti on hea mask kanda, eriti kui te ei tea, millist tüüpi baktereid uuritakse.
- Võtke ettevaatusabinõusid enne mis tahes tüüpi, isegi kahjutute bakterite käitlemist. Enne alustamist veenduge, et kõik teie keha avatud haavad oleksid täielikult kaetud.
